cz6288氢］氢气对胆管缺血再灌注损伤的治疗研究［研究生论文］-氢世纪
氢］氢气对胆管缺血再灌注损伤的治疗研究［研究生论文］-氢世纪
肝脏的缺血再灌注损伤在许多外科手术中见到，它是由多种因素参与的复杂的损伤过程，主要是产生过多的氧自由基，损伤肝细胞结构，引起肝脏功能障碍，最严重的后果是在肝脏外科手术后发生肝功能衰竭甚至死亡。国内外的肝胆外科学者们对于肝脏的缺血再灌注损伤研究往往只关注于肝脏在缺血再灌注损伤后肝组织内Kupffer细胞、肝细胞和肝窦内皮细胞的破坏和病理形态的改变，而忽略了胆道系统的损伤。然而，肝内胆道系统的损伤，可以引发手术后大量的并发症杭允贤，比如胆管发生狭窄、胆管的炎症反应、肝内胆汁大量淤积，很大程度上决定了手术后肝脏功能的恢复和移植器官的存活率。
氢是整个大自然界最简单的化学元素，是具有无味、无色和还原性的双原子气体，是水分子的主要组成成分。在宇宙物质组成中氢这种元素可以达到大约90%的比例迪拜钻戒旅馆，由此氢元素也被认为是整个宇宙的化学元素中最基本的。氢的特点是自身溶解度非常的低，不能主动同血红蛋白很好的结合，通过呼吸途径也不能够顺利的被机体大量的利用。过去大量的研究可以发现，氢气被认为是一种具有显著特点，能被用于抗氧化的理想气体，而不是具有生理性惰性的气体.可以通过抑制炎症相关的细胞因子，进而缓解炎症发生发展过程，最终达到抑制氧化应激反应的作用。因此氢气饱和生理盐水(HS)(即氢气溶解度达到饱和的生理盐水，氢浓度为0.6 mm01/L)也可以作为一种新型的抗氧化剂，能减少氧自由基反应，从而减少缺血再灌注损伤。目前已经有大量实验证明，氢气饱和生理盐水对大鼠脑、肾和肝等器官的缺血再灌注损伤有明显改善作用。机体内胆汁中有一定含量的葡萄糖，在胆汁的排泄过程中大部分被胆管重吸收，所以在正常情况下经过肝脏的胆汁中仅含有少量葡萄糖。某些因素损伤了胆管后，使胆管自身的功能受损，导致葡萄糖的经胆管的重吸收减少，葡萄糖在胆汁中的含量也就升高。超氧化物歧化酶(SoD)和谷胱甘肽(GSH)对维持机体的氧化与抗氧化的平衡起着关键作用童年禁恋，能加速清除体内自由基和过氧化物誓空大师，降低脂质过氧化物的生成，自由基和过氧化物对细胞和组织的损伤。MDA是非饱和性脂质过氧化反应的终产物，而非饱和脂质又是细胞膜的重要组成成分，因此组织内如A含量可以说是氧化应激反应程度及水平的敏感的重要指标。过氧化氢酶(CAT)是一种广泛存在于需氧动植物及微生物细胞中的氧化还原酶刘丛丹图片，其结构主要由4个具有相同多肽链的亚基组成，催化细胞内H202的分解是其主要的生物学功能，防止过多H202对细胞的危害，可以很大程度上反映氧化损伤的程度。Bcl2基因是一直以来研究最早的与凋亡有关的基因，也是目前最热点的调控细胞凋亡的基因家族初百军 ，而Fas基因主要是介导细胞凋亡宫洺喜欢谁，缺血再灌注损伤可以导致细胞的凋亡，所以可以通过检测Bc卜2基因和Fas基因的表达来反应细胞的凋亡情况。因此本实验通过建立70%的肝脏缺血再灌注模型后经尾静脉途径注射氢气饱和生理盐水，收集胆汁和肝组织，通过检测上述相关指标，以证明氢气饱和生理盐水对肝内胆管的缺血再灌注损伤的抗氧化保护作用，为新型抗氧化剂将来能够更快更好的应用于临床提供大量的理论基础。
目的:本实验通过建立大鼠肝内胆管缺血再灌注损伤(IR)动物模型，探讨静脉注射氢气饱和生理盐水是否对大鼠肝内胆管缺血再灌注损伤具有保护作用，观察其病理学改变，并从胆管上皮细Bcl-2/Fas基因表达、凋亡等方面探讨氢气饱和生理盐水可能的作用机制。
方法:将32只雄性SD大鼠随机分成4组:假手术组(S0组)，缺血再灌注组(IR组)，缺血再灌注+生理盐水组(IR+NS组)，缺血再灌注+氢气饱和生理盐水组(IR+HS组)，每各8只华容道精装版。用1%戊巴比妥钠以每1009体重O.6m1的剂量注射进入腹腔，等待麻醉药物效果显效后，用碘伏对大鼠的腹部进行消毒，然后沿着大鼠的腹正中线打开腹部，分离至胆总管及十二指肠，并于二者汇合处经十二指肠外用硬膜外导管逆行置管于胆总管内，固定并引流胆汁;分离肝门部，用无创血管夹夹闭肝左、中叶血管(包括动、静脉和胆管)，阻断血流盛世女皇商，并保持肝右、尾状叶血流通畅，按规定时间撤夹，恢复血供，从而制成70%肝缺血再灌注损伤模型。各组SD大鼠均于缺血60min，经尾静脉注射氢气饱和生理盐水安安听书网，再灌注120min后统一取左肝组织并收集胆汁(均为I/R前后两组)。肝组织分别用10%甲醛固定和冻存在－80°C冰箱内，HE染色后光镜病理学观察，观察肝组织和肝内胆管上皮细胞的病理形态变化;采用免疫组织化学法(PV二步法)观察肝组织中Bc卜2/Fas蛋白在肝内胆管上皮细胞的表达情况;Tunel法检测细胞凋亡情况;分光光度法检测丙二醛(malondialdehyde应崇江 ，MDA)和谷胱甘肽(glutathione，GSH)胡含量cz6288，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)和过氧化氢酶(catalase，CAT)的活力。将上面所有得到的数据用均数±标准差(X±s)表示打起黄莺儿，采用方差分析对样本均数进行比较;采用snk法对两两进行比较，使用SPSSl7.0统计软件进行统计学处理;统计检验P<0.05被认为差异具有统计学意义。结果:假手术组(S0组)，缺血再灌注组(IR组)，缺血再灌注+生理盐水组(IR+NS组)相比较，术后缺血再灌注+富氢水组(IR+HS组)的肝组织病理情况有所改善;胆汁中葡萄糖(Glu)的含量在IR前后升高的幅度明显降低(IR后值均大于IR前值);胆汁中y一谷酰转移酶(GGT)的活性在IR前后升高的幅度明显明显降低(工R后值均大于IR前值);IR组、IR+NS组、IR+HS组动物于建模术后肝组织内MDA含量明显升高，GSH含量降低，SOD活力和CAT活力下降:与IR+NS组相比较，IR+HS组术后肝组织内MDA含量升高较少(P<o.01).，GSH含量下降程度降低(P<0.01)，SOD活力和CAT活力下降程度也降低(P<O.01)。免疫组化法测bcl-2基因和Fas基因的表达，工R+HS组肝内胆管上皮细胞阳性细胞数明显比IR+NS组减少。Tunel检测肝内胆管上皮细胞凋亡，IR+HS组肝内胆管上皮细胞凋亡明显比IR+NS组减轻。结论:氢气饱和生理盐水可以减轻肝缺血再灌注后肝内胆道损伤，可以抑制肝脏缺血再灌注损伤所引发的氧化应激反应，减轻氧化损伤，可以抑制肝缺血再灌注后肝内胆管上皮细Bcl2/Fas蛋白的表达，减少细胞凋亡。王百洋
肝脏的缺血再灌注损伤在许多外科手术中见到，它是由多种因素参与的复杂的损伤过程，主要是产生过多的氧自由基，损伤肝细胞结构，引起肝脏功能障碍，最严重的后果是在肝脏外科手术后发生肝功能衰竭甚至死亡。国内外的肝胆外科学者们对于肝脏的缺血再灌注损伤研究往往只关注于肝脏在缺血再灌注损伤后肝组织内Kupffer细胞、肝细胞和肝窦内皮细胞的破坏和病理形态的改变，而忽略了胆道系统的损伤。然而，肝内胆道系统的损伤，可以引发手术后大量的并发症杭允贤，比如胆管发生狭窄、胆管的炎症反应、肝内胆汁大量淤积，很大程度上决定了手术后肝脏功能的恢复和移植器官的存活率。
氢是整个大自然界最简单的化学元素，是具有无味、无色和还原性的双原子气体，是水分子的主要组成成分。在宇宙物质组成中氢这种元素可以达到大约90%的比例迪拜钻戒旅馆，由此氢元素也被认为是整个宇宙的化学元素中最基本的。氢的特点是自身溶解度非常的低，不能主动同血红蛋白很好的结合，通过呼吸途径也不能够顺利的被机体大量的利用。过去大量的研究可以发现，氢气被认为是一种具有显著特点，能被用于抗氧化的理想气体，而不是具有生理性惰性的气体.可以通过抑制炎症相关的细胞因子，进而缓解炎症发生发展过程，最终达到抑制氧化应激反应的作用。因此氢气饱和生理盐水(HS)(即氢气溶解度达到饱和的生理盐水，氢浓度为0.6 mm01/L)也可以作为一种新型的抗氧化剂，能减少氧自由基反应，从而减少缺血再灌注损伤。目前已经有大量实验证明，氢气饱和生理盐水对大鼠脑、肾和肝等器官的缺血再灌注损伤有明显改善作用。机体内胆汁中有一定含量的葡萄糖，在胆汁的排泄过程中大部分被胆管重吸收，所以在正常情况下经过肝脏的胆汁中仅含有少量葡萄糖。某些因素损伤了胆管后，使胆管自身的功能受损，导致葡萄糖的经胆管的重吸收减少，葡萄糖在胆汁中的含量也就升高。超氧化物歧化酶(SoD)和谷胱甘肽(GSH)对维持机体的氧化与抗氧化的平衡起着关键作用童年禁恋，能加速清除体内自由基和过氧化物誓空大师，降低脂质过氧化物的生成，自由基和过氧化物对细胞和组织的损伤。MDA是非饱和性脂质过氧化反应的终产物，而非饱和脂质又是细胞膜的重要组成成分，因此组织内如A含量可以说是氧化应激反应程度及水平的敏感的重要指标。过氧化氢酶(CAT)是一种广泛存在于需氧动植物及微生物细胞中的氧化还原酶刘丛丹图片，其结构主要由4个具有相同多肽链的亚基组成，催化细胞内H202的分解是其主要的生物学功能，防止过多H202对细胞的危害，可以很大程度上反映氧化损伤的程度。Bcl2基因是一直以来研究最早的与凋亡有关的基因，也是目前最热点的调控细胞凋亡的基因家族初百军 ，而Fas基因主要是介导细胞凋亡宫洺喜欢谁，缺血再灌注损伤可以导致细胞的凋亡，所以可以通过检测Bc卜2基因和Fas基因的表达来反应细胞的凋亡情况。因此本实验通过建立70%的肝脏缺血再灌注模型后经尾静脉途径注射氢气饱和生理盐水，收集胆汁和肝组织，通过检测上述相关指标，以证明氢气饱和生理盐水对肝内胆管的缺血再灌注损伤的抗氧化保护作用，为新型抗氧化剂将来能够更快更好的应用于临床提供大量的理论基础。
目的:本实验通过建立大鼠肝内胆管缺血再灌注损伤(IR)动物模型，探讨静脉注射氢气饱和生理盐水是否对大鼠肝内胆管缺血再灌注损伤具有保护作用，观察其病理学改变，并从胆管上皮细Bcl-2/Fas基因表达、凋亡等方面探讨氢气饱和生理盐水可能的作用机制。
方法:将32只雄性SD大鼠随机分成4组:假手术组(S0组)，缺血再灌注组(IR组)，缺血再灌注+生理盐水组(IR+NS组)，缺血再灌注+氢气饱和生理盐水组(IR+HS组)，每各8只华容道精装版。用1%戊巴比妥钠以每1009体重O.6m1的剂量注射进入腹腔，等待麻醉药物效果显效后，用碘伏对大鼠的腹部进行消毒，然后沿着大鼠的腹正中线打开腹部，分离至胆总管及十二指肠，并于二者汇合处经十二指肠外用硬膜外导管逆行置管于胆总管内，固定并引流胆汁;分离肝门部，用无创血管夹夹闭肝左、中叶血管(包括动、静脉和胆管)，阻断血流盛世女皇商，并保持肝右、尾状叶血流通畅，按规定时间撤夹，恢复血供，从而制成70%肝缺血再灌注损伤模型。各组SD大鼠均于缺血60min，经尾静脉注射氢气饱和生理盐水安安听书网，再灌注120min后统一取左肝组织并收集胆汁(均为I/R前后两组)。肝组织分别用10%甲醛固定和冻存在－80°C冰箱内，HE染色后光镜病理学观察，观察肝组织和肝内胆管上皮细胞的病理形态变化;采用免疫组织化学法(PV二步法)观察肝组织中Bc卜2/Fas蛋白在肝内胆管上皮细胞的表达情况;Tunel法检测细胞凋亡情况;分光光度法检测丙二醛(malondialdehyde应崇江 ，MDA)和谷胱甘肽(glutathione，GSH)胡含量cz6288，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)和过氧化氢酶(catalase，CAT)的活力。将上面所有得到的数据用均数±标准差(X±s)表示打起黄莺儿，采用方差分析对样本均数进行比较;采用snk法对两两进行比较，使用SPSSl7.0统计软件进行统计学处理;统计检验P<0.05被认为差异具有统计学意义。结果:假手术组(S0组)，缺血再灌注组(IR组)，缺血再灌注+生理盐水组(IR+NS组)相比较，术后缺血再灌注+富氢水组(IR+HS组)的肝组织病理情况有所改善;胆汁中葡萄糖(Glu)的含量在IR前后升高的幅度明显降低(IR后值均大于IR前值);胆汁中y一谷酰转移酶(GGT)的活性在IR前后升高的幅度明显明显降低(工R后值均大于IR前值);IR组、IR+NS组、IR+HS组动物于建模术后肝组织内MDA含量明显升高，GSH含量降低，SOD活力和CAT活力下降:与IR+NS组相比较，IR+HS组术后肝组织内MDA含量升高较少(P<o.01).，GSH含量下降程度降低(P<0.01)，SOD活力和CAT活力下降程度也降低(P<O.01)。免疫组化法测bcl-2基因和Fas基因的表达，工R+HS组肝内胆管上皮细胞阳性细胞数明显比IR+NS组减少。Tunel检测肝内胆管上皮细胞凋亡，IR+HS组肝内胆管上皮细胞凋亡明显比IR+NS组减轻。结论:氢气饱和生理盐水可以减轻肝缺血再灌注后肝内胆道损伤，可以抑制肝脏缺血再灌注损伤所引发的氧化应激反应，减轻氧化损伤，可以抑制肝缺血再灌注后肝内胆管上皮细Bcl2/Fas蛋白的表达，减少细胞凋亡。王百洋